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技术文章

手持ATP荧光检测仪的使用方法

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ATP(Adenosine Triphosphate),中文名为腺嘌呤核苷三磷酸,又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于细菌等微生物细胞内,ATP是微生物新陈代谢的能量物质。ATP生物发光法是利用ATP试剂中若干组分如荧光素-荧光素酶等与被测样本反应产生光子,再利用专门研制的荧光检测仪来捕捉和检测发光值,由于被测样本所含细菌等微生物的数量与所含的ATP值、以及ATP值与发光值之间存在一定的函数关系,因此通过检测发光值即能得到被测标本所含细菌等微生物含量。

国内外ATP仪器

手持ATP仪比台式ATP仪更适合现场快速检测

为了满足现场快速检测的需求,ATP荧光检测仪宜选择手持ATP荧光检测仪(也叫手持式ATP荧光检测仪),而实现流动状态即时检测,因为尽管大型的台式ATP荧光检测仪在灵敏度方面可能优于手持式ATP仪,但它只能在实验室状态下使用,不利于餐饮服务、医疗感控等流动场所现场检测。

ATP方法使用和评价

ATP荧光检测法能在十几秒内实现检测,它大大提升了传统细菌培养法24-48小时的工作效率,ATP方法的实现包括仪器、试剂和如何使用三大要素。

仪器

当仪器和试剂配合使用,整体灵敏度达到10-10摩尔ATP范围时,可以用于 食品表明微生物检测、手卫生检测、餐饮器具洁净度检测、重点科室和重要活动场所(如奥运会、世博会、人大政协会议等)物表检测和卫生安保、食品加工器具、工作台等关键控制点消毒结果检测、医疗环境工作平台(器械表面、内窥镜、空调进出气口)卫生学即时评估,其实时监测数据能有效配合HACCP或GMP体系管理的要求;可用于更高要求的检测如复用医疗器械清洗效果后评估和二次清洁处理评价、医疗用水检测等。当然目前国外ATP设备和试剂的研发已经向更高目标——可检测到1O至10摩尔水平的ATP努力,检测试剂也可达到5个细菌细胞的水平

试剂

专用的ATP试剂盒,必须是可去除游离ATP和体细胞ATP,只针对细菌细胞ATP检测,所谓去除干扰物,这是基本要求。其次荧光素酶、虫萤光素、裂解液、取样拭子等组分zui好设计成一体化,整体便于现场携带方便检测使用,试想如果不是ATP试剂一体化拭子形式,而是各组分瓶瓶罐罐带到现场临时配制试剂如何能做到准确性和现场快速检测呢?

如何使用

取样

是影响准确性和一致性的关键之一,可按照<<医院消毒卫生标准附录A(规范性附录)采样及检查方法>>等规范要求再参照手持式ATP仪说明书采样、检测、计算得出结果并记录报告。采样:(面积类)将ATP拭子采样棒一支在物体表面或双手指曲面从指跟到指端来回涂擦个两次(一只手涂擦面积约30cm2),并随之转动采样拭子。(体积类)将ATP拭子采样棒一支在待测液体充分浸湿。检测:将拭子放入手持ATP仪,获得被测样本与细菌污染程度相对应的ATP生物荧光值,得出菌落数指标(详见下文操作步骤及定标评价)。

结果判读

以上取样、检测全过程在1分钟之内快速完成,比起24-48小时的传统细菌培养优势巨大。细菌数量与细菌内所含ATP量有明确的相关性,通过检测ATP含量可间接得出细菌数量,即ATP荧光检测仪检测结果显示的发光值——相对照度单位RLU读数与常规细菌培养法结果菌落数CFU具有很高的相关性,两者没有统计上的显著差异,因此这也是ATP荧光法细菌检测的理论基础。举例来说,某食品加工厂上班前使用ATP检测仪对生产工人进行手卫生检测,检测值<80RLU合格参考值时,判定洗手消毒合格;检测值≥80RLU合格参考值时判定洗手消毒不合格,需要重新洗手直至满足规定的合格参考值才能上岗工作,合格参考值(如80)的确定需科学合理,不同应用场合不建议规定统一的参考值,须根据不同品牌ATP荧光仪、ATP试剂、被测对象洁净度不同要求等具体情况和对一定量的检测数据进行统计学分析来确定。


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